Лабораторная диагностика малярии: сдать кровь, клиники, профилактика, анализ

Тревожные симптомы

Содержание:

Заболевание начинается не сразу. Малярия имеет инкубационный период, который может длиться от 1 до 3 недель. В некоторых случаях инкубационный период может достигать 5 недель. Тропическая малярия развивается в течение 14 дней. После происшествия инкубационного периода заболевание проявляется резко. Симптомы включают в себя боль в теле, озноб, кожные покровы становятся холодными, появляется одышка. В некоторых случаях больной страдает от рвоты и жажды.

Жизненный цикл заболевания

Симптомы сопровождаются тяжелым биением сердца, тахикардией, увеличением печени и селезенки. Приступы лихорадки могут длиться от 1 до 15 часов. Проявления лихорадки сопровождается обильным потоотделением и слабостью в теле. После приступа состояние пациента улучшается, температура тела снижается до нормального уровня и человек чувствует себя удовлетворительно. Но затем начинается новый приступ.

При использовании современной медицинской помощи заболевание характеризуется одним или двумя приступами. Без надлежащего лечения приступы повторяются очень часто, постепенно состояние пациента ухудшается. Из-за тяжести приступов страдает иммунная система организма, а также наступает упадок сил. В тяжелых случаях малярия дает осложнения на мозг, вызывает почечную недостаточность, психологические расстройства и малярийную кому.

Общий анализ

Диагностика любого заболевания начинается с опроса и осмотра больного. При обращении к врачу и подозрении на малярию особое значение имеет место положения пациента. Регионы распространения малярии, как правило, жаркие страны с тропическим или субтропическим климатом.

Заподозрить малярию в России можно только при условии, что человек недавно посещал страны, в которых присутствуют малярийные плазмодии.

Осмотр начинается с кожных покровов. При поражении организма плазмодием кожа становится сухой, появляются высыпания, которые сопровождается увеличением температуры тела. После осмотра по результатам полученных данных назначается общий анализ крови. Анализ крови на малярию берется утром, лучше натощак. Сдать кровь можно в любой клинике, однако в странах и городах, которые подвержены вспышкам малярии, медицинская инфраструктура обычно развита очень плохо. Из-за этого диагностика может затрудняться.

В результате лабораторного исследования будут отражены следующие параметры:

  • Цветовой показатель крови, параметр отражающий содержание гемоглобина в одном эритроците. В качестве нормы установлено значение 0,80-1,06. У больных малярией цветовой показатель находится ниже нормы, иногда показатель без отклонений.
  • Общее содержание эритроцитов снижается, за счёт того, что эти клетки активно захватываются плазмодии.
  • Количество гемоглобина также понижается. Плазмодий активно разрушает гемоглобин внутри клеток.
  • Средний объем эритроцитарных клеток снижен, В некоторых случаях значительно.
  • Уровень тромбоцитов повышается.
  • Как и при других воспалительных процессах, при малярии, значительно повышается уровень лейкоцитов в крови пациента.

Указанные результаты анализов не всегда говорят о развитии именно малярии. Говорить о поражении организма плазмодием можно только в сочетании с клиническими симптомами. Если картина неясна, диагноз подтвердить нельзя. В таком случае врач назначает дополнительные методы исследования.

Биохимия крови

Для определения малярии лабораторная диагностика особенно важна. Биохимическое исследование назначается в качестве дополнительной меры диагностики. Этот тип исследования проводится утром, натощак. Анализ, для которого используется венозная кровь, проводиться только в лабораторных условиях. Результаты теста могут быть готовы уже через сутки, но при большой загрузке лаборатории, они могут предоставляться через несколько дней.

Анализ проводится на следующие показатели:

  • АЛТ и АСТ или печеночная проба. Эти два показателя имеют большое значение в диагностике заболеваний печени. При диагностике малярии эти вещества используются в качестве подтверждения влияния плазмодия на печень. Если в организме активно действует возбудитель малярии, оба показателя будут повышены.
  • Билирубин. Этот фермент органической природы появляется в печени в результате распада клеток гемоглобина. Так как при поражении организма плазмодием концентрация гемоглобина снижается, то продукт его распада активно накапливается в печени. Показатель прямого и непрямого билирубина будет повышен.
  • Альбумин. Уровень этого белка при поражении малярией обычно повышен. Это связано с изменением структуры крови, а также обезвоживанием организма в результате тошноты и рвоты.

Анализ мочи

Каждый человек, который сдавал мочу для анализа, знает, что эта процедура обычно проводится дома. При подозрении на малярию, пациент госпитализируются, и все тесты проводятся в стенах медицинского учреждения. Сбор биологического образца проводится утром. В качестве емкости используется специальный контейнер из пластика или стекла. Такой контейнер можно приобрести в аптеке. Для сбора материала также можно использовать подручные средства, чистую стеклянную банку или пластиковую емкость. Перед использованием емкость необходимо подготовить, тщательно вымыть и обработать кипятком. После сбора образца его необходимо доставить в лабораторию или поликлинику.

Результат исследования обычно готов через сутки:

  • В результате анализа может быть отмечено обнаружение сгустков крови в моче. Эти сгустки видны невооруженным глазом. Это явление называется гематурия.
  • В результате активного распада эритроцитов в моче может повыситься количество гемоглобина. В результате анализа это состояние может быть отмечено, как гемоглобинурия.
  • В связи с активным снижением эритроцитарных клеток в крови пациента, разрушенные эритроциты попадают в мочу. В моче показатель эритроцитов будет повышен. При этом вкрапление крови или изменение цвета мочи не наблюдается.

Дополнительные методы исследования

Одним из самых достоверных методов исследования является диагностика Толстой капли крови. Этот вид медицинского теста может быть проведен в любом медицинском учреждении. С помощью Толстой капли крови можно определить вид плазмодия, который проник в организм. Это позволяет подобрать наиболее эффективное лечение, направленное против этого вида возбудителя малярии. Внимание лаборатории направляется на изучение увеличенных в объеме и бледных эритроцитов, Именно они содержат в себе образец плазмодия. Кроме вида микроорганизма этот медицинский тест позволяет определить стадию заболевания, а также распространение плазмодиев в пределах организма.

Лабораторная изучение тонкой капли крови назначается, если предыдущие тесты не дали однозначных результатов. Этот тип исследования также позволяет выявить стадию заболевания и распространение плазмодиев по организму. Используется и другие лабораторные приёмы.

Иммунологическое исследование направлено на выявление одного из видов заболевания, тропической малярии. Это быстрый и доступный способ диагностики. Тест может быть проведён в лабораторных условиях, любая клиника может предоставить подобные услуги. Возможно самостоятельное проведение анализа на малярию. Это делается с помощью теста экспресс-диагностики, который продается в аптеках.

Положительный результат говорит о присутствии в организме плазмодия тропической малярии, отрицательный результат свидетельствует о том что человек здоров.

Методы серологического исследования (иммуноферментный анализ или ИФА) направлены на поиск специфических антител, которые вырабатывает организм для борьбы с малярией. Этот тип анализа особенно эффективен в регионах, подверженных вспышкам заболевания. Подобные медицинские тесты используется в качестве скрининга для предотвращения эпидемий.

Полимеразная цепная реакция или ПЦР один из современных и дорогостоящих методов исследования. Этот медицинский тест позволяет выявить малярию даже при незначительном содержании плазмодиев в крови и используется в качестве метода подтверждения диагноза. Не все медицинские учреждения могут предоставить эту услугу.

Описание

Малярийные плазмодии – паразитические простейшие микроорганизмы, которые вызывают малярию. В жизненном цикле плазмодиев два хозяина: человек или позвоночное животное, птица, пресмыкающееся и комар. В качестве паразитов человека обычно распространены четыре вида плазмодиев: Plasmodium falciparum, Plasmodium vivax, Plasmodium malariae и Plasmodium ovale. Малярия характеризуется лихорадкой, ознобом, увеличением селезенки и печени, анемией. Определение антигенов к плазмодиям является подтверждением инфицирования или свидетельствует о напряженности иммунитета.

Малярийные плазмодии – паразитические простейшие микроорганизмы, которые вызывают малярию. В жизненном цикле плазмодиев два хозяина: человек или позво

Показания к назначению

Диагностика малярии.

Интерпретация результатов/Информация для специалистов

Повышение референсных значений: инфицирование малярийным плазмодием или напряженность иммунитета к инфекции.
Понижение референсных значений: отсутствие инфицирования. Ранний период инфицирования, когда антитела еще не сформировались.

Читайте также:  лечение экземы с помощью АСД - характеристика, рекомендации, схемы лечения

Правила взятия:

Взятие крови осуществляют из вены, пальца, мочки уха, у новорожденных – из пятки, натощак. 

Диагностика малярии с использованием микроскопического метода

Микроскопия препарата «толстая капля» и тонкого мазка, позволяющая обнаружить паразитов, их количество и видовую принадлежность, является ведущим методом диагностики малярии. Она проводится при малейшем подозрении на это заболевание, независимо от температурной реакции пациента. Для определения видовой принадлежности паразитов и стадии заболевания используется тонкий мазок крови. В толстой капле локализуется больше паразитов, чем в мазке. Этот метод диагностики превосходит методику определения наличия возбудителей малярии в тонком мазке крови в 20 — 40 раз.

В периферической крови паразиты обнаруживаются через определенное время после заражения:

  • при 3-х дневной малярии — через 8 — 12 дней,
  • при тропической — от пяти с половиной дней до 12,
  • при 4-х дневной — через 15 — 21 день,
  • при малярии, подобной 3-х дневной — через 9 — 15 дней.

Паразиты в крови присутствуют как во время лихорадочного приступа, так и в межприступный период и при паразитоносительстве.

diagnostika-malyarii-p-5

Рис. 3. Техника приготовления тонкого мазка.

Техника приготовления «толстой» капли

Полученная при проколе пальца капля крови наносится на предварительно очищенное и сухое предметное стекло и размазывается до получения пятна 1 см в диаметре. После подсушивания на воздухе предметное стекло заливается краской Романовского—Гимзы. По истечении 40-минутной экспозиции препарат ополаскивается под проточной водой и подсушивается при комнатной температуре, установленный в вертикальное положение.

Под микроскопом исследуется не менее 100 полей зрения. Более эффективным считается исследование 2-х толстых капель в течение 2,5 минут, чем 1-й капли в течение 5-и минут. 100 полей зрения просматриваются даже в том случае, когда малярийные плазмодии выявились уже в первых полях. Это производится для того, чтобы не пропустить микст-инфекцию.

diagnostika-malyarii-p-7

Рис. 4. Микроскопия препарата «толстая капля» и тонкого мазка является ведущим методом диагностики малярии.

Порог обнаружения паразитов

Порогом обнаружения малярийных плазмодиев называется минимальная концентрация возбудителей, которую возможно выявить при микроскопировании препарата «толстая капля». При заболевании этот показатель составляет 5 паразитов в одном микролитре крови. При просмотре 100 полей зрения обследуется 0,2 мкл крови.

При наличии косвенных признаков малярии (пребывание в эндемичных зонах, гипохромная анемия, обнаружение пигмента в моноцитах) и отрицательных результатов исследования препаратов «толстая капля», исследование вновь повторяется более тщательно, и не одно, а серия, состоящая из 4 — 6 препаратов при одном уколе, либо полученных при заборе крови, который производится 4 — 6 раз в сутки в течение 2 — 3 дней.

Интенсивность паразитемии определяется знаком «+».

  • 1 (+) обозначает выявление от 1 до 100 паразитов в 10 п/зр, что соответствует 5 — 50 плазмодиям в одном мкл крови;
  • 2 (+) обозначает выявление от 10 до 100 паразитов в 10 п/зр, что соответствует 50 — 500 плазмодиям в одном мкл крови;
  • 3 (+) обозначает выявление от 1 до 10 паразитов в 1 п/зр, что соответствует 500 — 5000 плазмодиям в одном мкл крови;
  • 4 (+) обозначает выявление от 10 до 100 паразитов в 1 п/зр, что соответствует 5000 — 50000 плазмодиям в одном мкл крови;
  • 5 (+) обозначает выявление более 100 паразитов в 1 п/зр, что соответствует более 50000 плазмодиям в одном мкл крови.

Интенсивность паразитемии можно вычислить по количеству паразитов на 100 эритроцитов в 10 полях зрения, либо по соотношению числа паразитов и лейкоцитов в 1 мкл крови.

По интенсивности паразитемии определяется прогноз при тропической малярии. При других видах заболевания более 2% эритроцитов не поражается.

Формы малярийных плазмодиев в разные фазы развития

В препарате крови «толстая капля» возможно определить плазмодии малярии, находящиеся на разных стадиях развития — трофозоида, кольца, шизонта, морулы, и гаметы.

diagnostika-malyarii-p-8

Рис. 5. Plasmodium ovale имеет округлую форму.

diagnostika-malyarii-p-10

Рис. 6. Молодой трофозоит Plasmodium vivax в эритроците.

diagnostika-malyarii-p-11

Рис. 7. Юные трофозоиды Plasmodium falciparum.

diagnostika-malyarii-p-13

Рис. 8. Кольцевидные трофозоиты Plasmodium vivax.

diagnostika-malyarii-p-15

Рис. 9. Амебовидные шизонты Plasmodium vivax.

diagnostika-malyarii-p-17

Рис. 10. Зрелые шизонты Plasmodium vivax.

diagnostika-malyarii-p-20

Рис. 11. Женские гаметоциты возбудителей тропической малярии.

diagnostika-malyarii-p-22

Рис. 12. Гаметоциты плазмодий тропической малярии имеют полулунную форму, плазмодии других видов заболевания — округлую.

diagnostika-malyarii-p-24

Рис. 13. В процессе роста в цитоплазме паразитов накапливается пигмент. На фото Р. vivax.

Контроль эффективности лечения

При адекватном лечении малярии уровень паразитемии в течение суток снижается на 25% и более, а через 3 суток от начала лечения он должен составлять не более 25% от исходного. В случае обнаружения паразитов на 4-е сутки от начала лечения свидетельствует о развитии лекарственной резистентности возбудителей.

Кратность проведения исследования

При выявлении малярии микроскопическое исследование препаратов крови проводится ежедневно. При тяжелой форме тропической малярии микроскопия проводится 2 раза в день до исчезновения возбудителей в крови и далее еженедельно до 28 дня лечения с целью оценки его эффективности и выявления резистентности к противомалярийным препаратам.

diagnostika-malyarii-p-25

Рис. 14. Эритроциты при инфицировании P. vivax и P. ovale увеличиваются, обесцвечиваются и деформируются, в них появляется токсическая зернистость.

При инфицировании P. malariae и P. falciparum форма и размеры эритроцитов не изменяется. На фото деформированные эритроциты больного малярией (микрофотография в сканирующем микроскопе).

Иммунологические методы диагностики малярии

С помощью серодиагностики малярии возможно выявить в сыворотке крови пациента антитела и растворимые паразитарные антигены. Серологические реакции показаны к применению в случаях появления у больных лихорадки неясного генеза, гепатоспланомегалии, анемии, а также для исследования крови донора — предполагаемого источника инфекции. Серологические реакции применяются при эпидемиологическом наблюдении за лицами, проживающими в неблагополучных по малярии в прошлом территориях.

Чаще всего при диагностике малярии применяется НРИФ — непрямая реакция иммунофлуоресценции. Используются так же ИФА, РИГА и др. Внедряется в практику использование реакции энзим-меченых антител (РЭМА).

В случаях очень низкой паразитемии показано применение ПЦР (полимеразной цепной реакции). Дороговизна и сложность применения данной методики не позволяет широко ее использовать.

Разработаны новые методы диагностики малярии — экспрессного микроскопического анализа препаратов крови с использованием флюоресцирующих красителей, позволяющие в течение двух минут выявить паразитов тропической малярии, количество которых более 60 в 1 мкл гемолизированой крови.

При малярии антитела появляются на 8 — 27 день паразитемии. Первыми появляются антитела IgM, затем — антитела IgG. Антитела после перенесенной малярии и успешного излечения могут длительно сохраняться в крови человека — от 0,5 до 2 и даже 20 лет.

diagnostika-malyarii-p-27

Рис. 15. Чаще всего при диагностике малярии применяется НРИФ — непрямая реакция иммунофлуоресценции.

Виды плазмодий

Всего различают четыре различных вида малярии и четыре типа плазмодий, ее вызывающие:

  1. Plasmodium falciparum, что провоцирует тропическую лихорадку — одну из самих опасных и нуждающихся в срочном лечении разновидностей заболевания.
  2. Plasmodium vivax — провоцирует появление трехдневной малярии.
  3. Plasmodium malariae — является источником четырехдневной лихорадки.
  4. Plasmodium ovale — главная причина малярии овале (недуга вроде трехдневной).

Приготовление мазка крови и толстой капли


Приготовление мазка крови и толстой капли для диагностики малярии.

  1. Перед манипуляцией наденьте перчатки.
  2. Подготовьте необходимое оборудование и инструментарий:
  • Скарификатор одноразового использования.
  • 70% раствор этилового спирта.
  • Ватные шарики.
  • Предметное стекло.
  • Предметное стекло с шлифованной краем.
  • Чашку Петри.
  • Стерильный лоток.
  • Лоток для отработанного материала.
  • Сухое мыло.
  • Марлевую салфетку.

Инструментарий и материал должны быть стерильными. Предметное стекло — чистое, сухое, обезжиренное.

3.  Подготовка пациента.

  • Предложите пациенту сесть удобно на стул.
  • Объясните ему суть манипуляции.
  • Выясните, какая рука у пациента нерабочая.
  • Помассируйте безымянный палец.
  • Обработайте кожу ногтевой фаланги ватным шариком, смоченным 70% этиловым спиртом по всем правилам и осушите вторым (сухим) ватным шариком.
  • Соблюдайте правила этики и деонтологии при общении с пациентом.

4. Приготовление мазка крови.

  • Сделайте прокол кожи скарификатором.
  • Первую каплю снимите сухим ватным шариком.
  • Прикоснитесь нижней поверхностью предметного стекла ко второй капле на пальце на расстоянии 1-1.5 см от края стекла.
  • Переверните стекло каплей и возьмите в левую руку боковые ребра стекла. Капля располагается сверху и справа.  Диаметр капли на стекле должен быть 2-3 мм.
  • Правой рукой установите стекло с шлифованной краем слева от капли под углом 450 с наклоном в сторону капли. Стекло с шлифованным краем должно быть немного уже предметного стекла с каплей крови. Продвигайте шлифованный край вправо до соприкосновения с каплей и подождите, пока кровь растечется по краю шлифованного стекла.
  • Не надавливая, быстрым равномерным движением проведите стеклом с шлифованной краем по предметному стеклу, пока капля не будет исчерпана. Мазок должен быть тонким и равномерным, иметь светло-розовую окраску, просвечивать, занимать ½ — ¾  стекла и заканчиваться щёточкой
  • Если крови выделилось недостаточно, предложите пациенту опустить руку вниз — выжимать каплю крови нельзя!
  • Не прикасайтесь предметным стеклом к коже!
Читайте также:  Максифам, поиск и наличие в аптеках города Москва

5. Приготовление «толстой капли».

  • На предметное стекло нанесите 2-3 капли крови на небольшом расстоянии друг от друга.
  • Стеклянной палочкой или углом другого предметного стекла смешайте их.   Смешивайте легко, чтобы образовалась пятно диаметром 1,5 см. Слой крови не должен быть слишком толстым, иначе при высыхании образуется просто корка, которая отвалится.

6. Оформите сопроводительную документацию по известным Вам правилам и требованиям.

7. Транспортировка в лабораторию.

  • Подсушите мазок и толстую каплю на воздухе. На поверхности стекла ближе к началу мазка напишите номер, совпадающий с номером на направлении.
  • Изготовленные препараты уложите в чашку Петри и в таком виде транспортируйте в лабораторию.

8. Поместите использованное оборудование в дезинфицирующий раствор.

9. Проведите обеззараживание перчаток.

infection-net.ru

Техника забора крови и приготовления мазков для исследования на малярию.

Достоверное установление диагноза малярии осуществляется исследованием препаратов толстой капли крови и тонкого мазка, и обнаружением в них малярийных паразитов.

Для приготовления препаратов, кровь обычно берут из 4-го пальца левой руки (меньше подвергающегося загрязнению). Концевую фалангу 4-го пальца предварительно протирают кусочком марли или ваты, пропитанной спиртом, после чего спирту дают испариться с поверхности кожи. Укол наносят копьём на глубину 2-3 мм, в зависимости от толщины кожи.

Выступившую на месте прокола первую каплю крови снимают кусочком сухой ваты, дают появиться второй капле, из которой приготовляют препарат.

Предметные стекла должны быть тщательно обезжирены. Для этого их кипятят в мыльном растворе, затем промывают в мыльном растворе. Затем промывают водопроводной и дистиллированной водой и высушивают спиртом.

Приготовление толстой капли.

В капле крови, выступившей из укола, осторожно прикасаются по­верхностью предметного отекла, после чего легким круговым движением, распределяется кровь на большой поверхности, для того, чтобы слой крови не был чересчур толстым (величина капли как 2ух-копевчная монета).

Обычно на одно стекло берут 2 капли, на некотором расстоянии друг от друга, надпись делается восковым карандашом. Капле дают высохнуть на воздухе без подогревания в горизонтальном положении.

Приготовление тонкого мазка

На поверхность предметного стекла на средней линии, ближе к од­ному концу стекла наносят маленькую, каплю крови. Стекло, (каплей и направо) прижимают к горизонтальной поверхности, стола, двумя пальцами правой руки (придерживать отекло следует за ребро). Правой рукой берут шлифованное стекло (край шлифованного стекла должен быть уже предметного), которое устанавливается по середине предметного стекла перед каплей под углом 45°.

Если стекло наклонять под меньшим углом, получится слишком тонкий мазок, а если шлифованное стекло наклонять под большим градусом — мазок будет очень толстым. Затем шлифованное стекло при том же накло­не подводиться к капле до соприкосновения с ней. Капля растекается в остром углу между стеклами;

После того, как кровь распределится ровной полоской между предмет­ным стеклом и краем шлифованного, стекла, последнее легким и быстрым движением продвигается по предметному стеклу в обратном направлении, т.е. справа налево, и кровь, следуя за шлифованным стеклом, тонким слоем равномерно распределяется по поверхности предметного стекла.

После того, как кровь высохнет, у одного края мазка иглой, углом предметного стекла или простым карандашом делают надпись (фамилия, дата, номер карточки и пр). Мазки высушиваются на воздухе (избегать подогревания, не допускать мух).

Высохшие на воздухе мазки, погружают для фиксации в широкогорлую банку с фиксирующей жидкостью (метиленовый алкоголь) на 3 мин или в смеси из равных частей спирта и эфира на 20-30 минут.

infection.in.ua

Приготовление мазков крови, толстой капли и их окраска

Для проведения данных исследований необходимо следующее оснащение рабочего места:

  1. Предметные стекла простые и шлифованные.
  2. Покровные стекла.
  3. Лоток эмалированный с мостиком для препаратов.
  4. Промывалка.
  5. Мерные цилиндры емкостью 100 мл.
  6. Пинцеты Корне.
  7. Песочные часы.
  8. Пипетки градуированные на 1, 2, 5 и 10 мл.
  9. Краска Романовского.
  10. Азур.
  11. Эозин.
  12. Краска Май-Грюнвальда.
  13. Краска Лейшмана.
  14. Метиловый спирт.
  15. Этиловый 96° спирт.
  16. Эфир.
  17. Двууглекислый натрий.
  18. Ледяная уксусная кислота.
  19. Дистиллированная вода.

Подготовка предметных стекол для приготовления мазков крови и толстой капли

Качество препаратов крови зависит от чистоты предметных стекол, поэтому новые и бывшие в употреблении стекла подвергают специальной обработке. Для этого с них предварительно удаляют иммерсионное масло кусочком ватки, смоченной бензином или эфиром и помещают на 30 минут в кастрюлю с кипящим мыльным раствором. Многократно промывают водопроводной и дистиллированной водой и помещают в смесь, состоящую из равных частей 96° спирта и эфира. Подготовленные предметные стекла извлекают из смеси с помощью пинцета, вытирают тряпочкой без ворса и, не прикасаясь к ним руками, во избежание загрязнения их поверхности, складывают в коробки, чтобы предохранить от пыли.

Мазки крови приготовляют на чистых предметных стеклах, пользуясь шлифованными предметными или покровными стеклами, чтобы край этих стекол был уже поверхности предметного стекла, на котором готовят мазки, углы стекол иногда надламывают или надпиливают.

Окраска и фиксация мазков крови

До окраски мазки крови необходимо зафиксировать: 1) метиловым алкоголем в течение 3 минут, 2) абсолютным этиловым спиртом – 5 минут, 3) чистым ацетоном – 5 минут, 4) смесью Никифорова (равные объемы 96° этилового сппрта и эфира) – 10-15 минут или 5) фиксатором Май-Грюнвальда в течение 3 минут.

Фиксацию препаратов крови производят следующим образом. В широкогорлую банку с притертой пробкой, в которую налит один из фиксаторов, устанавливают предметные стекла, сложенные попарно мазками наружу (рис. 30). При большом количестве мазков крови каждую пару предметных стекол захватывают кусочками разрезанной по длиннику полой резиновой трубки, что предотвращает соприкосновение мазков друг с другом. По истечении времени фиксации предметные стекла захватывают пинцетом Корне, располагают на мостике мазками кверху на небольшом расстоянии друг от друга. Мостик монтируют из двух одинакового диаметра и длины трубок или пипеток, которые соединяют между собой резиновой трубкой (расстояние между параллельно расположенными стеклянными трубками должно быть 5-6 см).

Для окрашивания фиксированных препаратов крови применяется краска Романовского, которая готовится следующим образом: 3,8 г сухой краски растворяют в 250 мл чистого метилового или этилового спирта. Оставляют на несколько дней и периодически взбалтывают, после чего прибавляют 250 мл чистого глицерина и вновь оставляют на 3-5 дней при частом взбалтывании. В работе применяют краску Романовского, имеющуюся в продаже, которую разводят на дистиллированной нейтральной воде. Так как дистиллированная вода не всегда бывает нейтральной, ее реакцию проверяют с помощью индикаторной бумаги.

Для получения лучшей окраски пользуются буферными растворами.

Для нейтрализации воду щелочной реакции подкисляют 1% раствором уксусной кислоты. Дистиллированную воду кислой реакции нейтрализуют 1% раствором двууглекислого натрия. Результаты нейтрализации устанавливают с помощью индикаторной бумаги.

Титр краски Романовского (количество капель основного раствора краски на 1 мл дистиллированной воды) устанавливают путем окрашивания мазков крови разными разведениями краски: 1, 2 или 3 капли на 1 мл нейтральной дистиллированной воды. Для окраски одного мазка требуется 3-4 мл разведенной краски Романовского. Разведение краски производят в цилиндрах, причем краску приливают к воде и размешивают, но не наоборот. По мазку с лучшей окраской устанавливают титр краски и время окрашивания; этим титром пользуются для окрашивания препаратов крови.

Окраска мазков крови по Романовскому

Высушенные на воздухе и надписанные мазки фиксируют одним из указанных выше фиксаторов, кладут на мостики и после высыхания фиксатора покрывают на 20-25 минут разведенной по титру краской Романовского. Краску сливают, а мазки смывают водой и высушивают.

Окраска мазков крови по Нохту

Для окраски препаратов по этому методу готовят краску азур-эозин: 1 г сухой краски азур II растворяют в 1 л дистиллированной воды и 1 г водного эозина растворяют в 1 л дистиллированной воды. Растворы хранят отдельно в темном месте.

Читайте также:  Фасциола гепатика - причины заражения и симптомы

Для окраски используют смесь, состоящую из 0,5 мл раствора азура, 0,5 мл раствора эозина и 3 мл дистиллированной воды.

На фиксированный и высушенный мазок крови наливают на 20-30 минут азур-эозин, затем краску смывают: водой и высушивают мазки.

Окраска мазков крови по Лейшману

Для окраски препаратов необходима краска Лейшмана, которая продается в готовом виде, и дистиллированная вода нейтральной реакции.

На нефиксированный мазок наливают 15-20 капель, краски Лейшмана (благодаря наличию спирта в краске; происходит одновременная фиксация препарата) на 2 минуты. Пипеткой прибавляют 30-40 капель дистиллированной воды нейтральной реакции, производят смешение реактива с водой, красят 4-5 минут. Мазок промывают водой и высушивают на воздухе.

Окраска мазков крови по Крюкову-Папенгейму

Для окраски препаратов надо иметь: 1) фиксатор Май-Грюнвальда, 2) дистиллированную воду нейтральной реакции и 3) разведенную по титру краску Романовского. Для приготовления фиксатора Май-Грюнвальда 0,5 г краски (эозиновокислой метиленовой синьки) растворяют в 200 мл метилового спирта; фиксатор имеется также в готовом виде.

На нефиксированный мазок на 3 минуты наливают 10-15 капель фиксатора Май-Грюнвальда. Не сливая фиксатор, на мазок наливают 10-15 капель дистиллированной воды нейтральной реакции и выдерживают одну минуту, затем фиксатор с водой сливают и на препарат наливают разведенную по титру краску Романовского. Через 15-20 минут препарат промывают водой и высушивают на воздухе.

Эпидемиология

Малярия — классическое зоонозное заболевание. Индуцируют малярию простейшие рода Plasmodium, четыре вида из которых патогенны для человека: P.vivax, P.ovale, P.malariae, P.falciparum. Для распространения малярии необходима цепочка, состоящая из источника инфекции, переносчика и теплого влажного климата.

Рассадник инвазии — больной человек или паразитоноситель, в их крови присутствуют половозрелые формы малярийного плазмодия — гаметоциты. В сложном ряду биопревращений плазмодия человек служит временным хозяином, в его организме происходит бесполый цикл развития малярийного паразита (шизогония).

Главный путь переноса — трансмиссивный. Переносчиком малярии выступают самки комара рода Anopheles. В географических поясах при высоком уровне заболеваемости распространен трансплацентарный путь от матери ребёнку. Не исключается возможность передачи малярии парентерально через кровь, если донор — носитель малярии или медицинский инструментарий после контакта с кровью не был надежно стерилизован.

Окончательным хозяином является самка комара, в ней совершается половой цикл развития плазмодия (спорогония). Самке, чтобы произошло созревание комариной личинки, требуется кровь и температура окружающего пространства не менее 16 градусов. Напитавшись кровью, комариная самка прячется в укромных темных углах: в строениях, в растительных дебрях, в теплых непроточных водоисточниках до конца созревания яиц. Жаркий влажный климат тропических регионов способствует размножению комаров в колоссальных количествах, что благоприятствует поддержанию высокого уровня заболеваемости круглогодично.

Патогенез

При укусе больного или паразитоносителя с кровью в желудок комара попадают мужские и женские гаметоциты, при их слиянии получается оокинета. Путём сложных преобразований из оокинеты вырабатывается значительное число спорозидов, которые мигрируют в слюнные железы комара.

Заражение человека совершается, когда во время укуса из слюнных желез инвазированного комара спорозоиды оказываются в крови, затем в гепатоцитах. Это стадия — тканевая шизогония.

В печени паразиты созревают бессимптомно из-за незначительного числа поражённых клеток, и свойства печени регенерировать. В клетках печени из спорозоидов вырабатываются тканевые шизонты, синтезирующие путем деления мерозоиты. Мерозоиты из клеток печени попадают в кровь, имплантируются в эритроциты. Начинается стадия эритроцитарной шизогонии.

Растущий паразит постепенно потребляет и разлагает внутриклеточные белки, главным образом гемоглобин. Мерозоиты разрывают эритроциты, при этом высвобождаются определенные факторы и токсины, которые индуцируют выделение цитокининов из макрофагов и гемолиз инфицированных клеток.

Паразит частично защищен от действия иммунной системы, потому что в большей части цикла в теле человека, он содержится в печени, клетках крови и относительно скрыт от специфических иммунных реакций.

Циркулирующие инфицированные клетки разрушаются в селезенке и паразит, выделяя адгезивные белки, заставляет клетки крови прилипать к стенкам мелких кровеносных сосудов, блокирует их и, тем самым, создает препятствие для прохождения паразита в селезенку.

Часть мерозоитов гибнет, а часть встраивается в здоровые эритроциты и фаза эритроцитарной шизогонии возобновляется. Клинически этот процесс выражается циклическими приступами лихорадки.

Передвигаясь по кровотоку, токсические вещества и продукты распада эритроцитов повреждают ретикулярную формацию печени и селезенки, происходит увеличение структурных элементов этих органов. Со временем происходит замена ретикулярных клеток соединительной тканью. Формируется стойкая гепатоспленомегалия.

Некоторые спорозоиды P.vivax не сразу развиваются в мерозоиты экзоэритроцитарной фазы, а производят гипнозоиты, которые остаются бездействующими месяцы и даже годы. После периода покоя, они активируются и вновь начинают создавать мерозоиты.

Классическое описание пароксизмов лихорадки синхронизируется с очередной волной мерозоидов, высвобождающихся из эритроцитов.

Различие

При трехдневной малярии — инкубация 10-20 дней. При заражении гипнозоитами от 6 месяцев и более. Приступы строго цикличны, развиваются до полудня. Возможны рецидивы. Длится болезнь 2-3 года.

Малярия овале напоминает малярию трехдневную, но с более благоприятным протеканием. Приступы, большей частью, по вечерам. Бывают рецидивы. Длительность 3-4 года.

Четырехдневная малярия отличается самым доброкачественным течением. При ней отмечается низкая паразитемия. Эритроцитарная шизогония замедлена и длится годами. Из-за этого продолжительность заболевания до 4, иногда 50 лет.

Самое неблагоприятное течение у тропической малярии. Возникает полиорганная недостаточность: отек легких, генерализованные судороги, острая почечная недостаточность, циркуляторный коллапс, сопровождаемый комой и смертью.

Малярия у беременной женщины

Малярия во время беременности связана с существенными рисками для самой женщины, плода и ребенка. Симптомы и осложнения во время беременности варьируются от уровня заболеваемости в данной географической зоне и уровня приобретенного иммунитета.

В эндемичных районах уровень иммунитета высокий, и при заражении у женщины симптомы могут не проявляться, тем не менее паразиты присутствуют в плаценте и вызывают у беременной анемию. Это приводит к гипотрофии плода и детской смертности.

В областях с низким уровнем заболеваемости малярией при отсутствии у беременной женщины защитных антител, заболевание протекает тяжело и часто приводит к самопроизвольным абортам, мертворождениям, преждевременным родам.

Малярия приводит к материнской смертности от осложнений: почечная недостаточность, кровотечения, ДВС-синдром.

Рецидивы

Симптомы малярии могут возвращаться после затихания.

Повторный возврат — симптомы возвращаются после бессимптомного периода.Это вызвано паразитами, выжившими в крови в результате неадекватного или неэффективного лечения.

Рецидив — симптомы появляются вновь после удаления паразитов из крови, но сохраняющихся в спящих гипнозоитах в клетках печени.Рецидив происходит между 8-24 неделями при малярии овале и трехдневной малярии.

Реинфекция происходит тогда, когда организм в результате лечения избавился от паразита, вызвавшего инфекцию в прошлом, но произошло заражение вновь.

По версии ВОЗ критерием тяжелой малярии является один из этих признаков

  • Нарушение сознания вплоть до малярийной комы
  • Сильная слабость
  • Более 2 эпизодов судорог
  • Низкое артериальное давление (у взрослых ниже 70 мм ртутного столба, у детей — ниже 50 мм)
  • Геморрагический шок
  • Почечная недостаточность
  • Кровотечения на фоне ДВС-синдрома или гемолитическая анемия при Hb ниже 50 г/л
  • Отек легких
  • Уровень глюкозы ниже 2,2 ммоль/л
  • Невозможность усвоения пищи (неукротимая рвота)
  • Уровень ацидоза более 5 ммоль/л
  • Уровень паразита в крови, превышающий 100 000 мкл в областях с низкой интенсивностью передачи, или 250 000 мкл в областях с высокой интенсивностью передачи.

Уход за больным

Важнейшим условием эффективности проводимых лечебных мероприятий является уход за больными. Малярия настолько тяжелое и коварное заболевание, что необходим постоянный мониторинг состояния заболевшего. Во время приступа при появлении озноба больного укрывают, допустимо согревание грелками. При подъеме температуры раскрыть больного. к голове приложить пузырь со льдом. После обильного потоотделения, больного переодеть в сухое белье и обеспечить полный покой.

Между приступами при удовлетворительном состоянии пациента особой диеты не предусматривается — общий стол №15 и обильное питье. Во время приступа — стол №13. Цель этой диеты — поддержание сил организма и щажение органов пищеварения. Диета пониженной калорийности, содержит легкоперевариваемые продукты, без грубой клетчатки.Еду готовят на пару, варят. Пищу употребляют в протертом виде, теплую, дробно, маленькими порциями

Источники

  • https://krov.expert/zabolevaniya/laboratornaya-diagnostika-malyarii.html
  • https://citilab.ru/labs/119/services/49/49-10-205/34398.aspx
  • http://microbak.ru/infekcionnye-zabolevaniya/malyariya/diagnostika-malyarii.html
  • http://InfoParazit.ru/bakterii-i-infektsii/issledovaniya-na-malyariyu.html
  • http://www.medhelp-home.ru/mazok/tehnika-prigotovleniya-mazka-i-tolstoj-kapli-krovi.html
  • http://medistoriya.ru/infekcionnye-bolezni/malyariya-priznaki-simptomy.html

[свернуть]
Помогла статья? Оцените её
1 Звезда2 Звезды3 Звезды4 Звезды5 Звезд
Загрузка...